大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：可在贴壁和悬浮状态中混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次传代建议为1:2，传代情况为每2天更换培养液

备注：悬浮细胞需离心收集，贴壁细胞按照贴壁方法处理，使用无菌离心管收集培养基以用于过渡培养。

二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，在良好状态下用完全培养液灌满细胞瓶并密封。运输后，应使用75%酒精消毒细胞瓶外部，随后在超净台内进行无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，建议拍摄不同倍数的照片（最好为40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片则默认为状态良好。

细胞传代步骤

对于贴壁细胞：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，确认大部分细胞圆形脱落后，迅速轻敲瓶子并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出并转移至15ml离心管中，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两瓶T25），新增完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

对于悬浮细胞：

1. 方法一：收集细胞后于1000 RPM离心8-10分钟，弃上清，再加入1-2ml培养液混匀，按1:2比例分至新的含8ml完全培养基的新瓶中。
2. 方法二：可选择半数替换培养液，弃去一半培养基后，保持剩余细胞悬浮状态，按1:2比例分至新的含8ml完全培养基新瓶中。

细胞冻存步骤

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS洗涤。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，在沉淀中加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续将细胞转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

细胞复苏步骤

1. 小心取出冻存管（佩戴防护装备），快速置于37℃水浴解冻，直到无冰晶现象，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中，次日更换新鲜完全培养基继续培养。

三、注意事项

在运输过程中可能会出现细胞脱落，若脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，处理后分瓶传代。若培养过程中细胞状态不良，须提供前三天照片以供判断。

四、售后条款

若细胞出现问题，需在收到产品后48小时内反馈真实实验结果以便重发；如细胞活性有问题，请在7天内反馈并使用台盼蓝染色法检测活力。此外，细胞状态不良需提交前三天照片，未告知的视为合格。

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