PG电子提供的人恶性黑色素瘤细胞WM115的培养说明书包含了详细的细胞培养条件、处理、传代及冻存步骤，以确保细胞在实验中的高效表现和稳定性。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次传代建议1:2。传代后2天换液。备注：用无菌离心管收集瓶子中培养基，留作对照，如对比效果不佳，建议直接购买PG电子的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

细胞收到后，培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x、100x、200x各一张）。上传照片对于首次售后尤其重要，未提供照片的默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若未超过80%汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙、镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；如果细胞大部分变圆并脱落，迅速将其拿回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），加入新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移到15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1mlPG电子无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶；然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天，更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，如细胞较为松散可能产生脱落现象，这是正常的。如脱离较多，建议将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清用于对比培养。之后，沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），加入新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞问题及重发条件

若细胞出现问题，可以重发的情况包括：细胞在运输途中问题、各种损坏、培养液严重漏液等。关于细胞活性及其他问题，也需在限定时间内提供真实实验数据支持请求重发。

2）不予重发的情况

不重发的情况包括：客户自身操作不当导致的细胞状态问题，非PG电子推荐的培养体系等。请确保正确操作以保障细胞的存活和实验的顺利进行。